ELISA試劑盒檢測不成功的原因

更新時間：2017-06-26

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　　ELISA試劑盒即酶聯免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。由于ELISA方法靈敏，特異性強不需要特殊設備，所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有的技術要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤結果（即假陽性或假陰性）如標本的影響為大家解讀ELISA檢測的影響因素。
溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質（紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以洗脫，它可使H2O2釋放出原生態氧（O），從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質，即顯藍色，產生假陽性［2］。所以嚴重溶血標本禁用。
標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾測定結果。
標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5d內測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。
塑料試管能吸附抗原物質，樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。好使用真空采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。
標本凝固不全。在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；因此血液標本采集后使其充分凝固后再分。

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