一、模型構建的核心要素

1. 動物選擇與品系優化

• 常用物種：

  動物	優勢	適用場景
  新西蘭兔	骨骼解剖與人類相似，耐受性強，成本適中	臨界骨缺損（CSD）研究（占文獻80%）
  大鼠	操作便捷，適合高通量藥物篩選	早期機制探索、材料初步驗證
  犬/羊	骨代謝率接近人類，適合長期隨訪	負重骨修復、轉化醫學驗證

• 年齡與性別：

• 月齡選擇：成年兔（6月齡）骨愈合能力較弱，適合建立臨界缺損模型；3月齡幼兔愈合能力較強，需選擇更大缺損（如20mm）。

• 性別差異：雄性動物占比超90%，避免雌性激素周期干擾骨代謝評估。

2. 缺損尺寸標準化

• 臨界骨缺損（CSD）定義：缺損尺寸需超過動物自發愈合能力的極限。

• 成年新西蘭兔（6月齡）：≥1.4cm（中段缺損，含骨膜），術后12周愈合率<20%。

• 幼齡兔（3月齡）：需≥2.0cm才能抑制自發愈合。

• 大鼠：股骨或脛骨缺損長度通常為5-8mm（直徑2-3mm）。

• 手術關鍵參數：

  參數	標準值（成年兔）	技術要點
  缺損位置	橈骨中段（曲率最大處）	避開血管神經束，保留尺骨支撐
  骨膜處理	全剝離（防止殘留骨膜成骨）	使用骨刀或咬骨鉗精細操作
  術后固定	無需內固定（依賴尺骨支撐）	避免外固定器干擾自然愈合過程

二、手術操作流程（以兔模型為例）

1. 術前準備：

• 禁食12小時，異氟烷吸入麻醉（誘導濃度5%，維持1.5-2%）。

• 術區剃毛消毒，鋪無菌洞巾。

2. 手術步驟：

• 切口：沿橈骨背側縱行切開皮膚及筋膜，鈍性分離肌肉暴露橈骨。

• 截骨：用線鋸或骨刀切除預定長度骨段（如1.4cm），底剝離骨膜及骨間膜。

• 植入物處理：若測試材料，需將修復支架（如PCLMA-EN水凝膠、納米羥基磷灰石復合材料）精確植入缺損區。

3. 術后管理：

• 鎮痛：布洛芬緩釋片（10mg/kg，bid×3天）。

• 抗感染：頭孢唑林鈉（50mg/kg，qd×5天）。

• 活動限制：單籠飼養2周，避免劇烈運動。

三、模型驗證與評估體系

1. 影像學評估

• X射線：

• 評分標準（Lane-Sandhu評分）：0-4分評估骨痂形成、缺損閉合及塑形。

• 關鍵指標：術后12周骨連接率（≥1.4cm缺損組<20%）。

• Micro-CT：

  參數	判定標準	應用場景
  骨體積分數（BV/TV）	>25%為有效修復	量化新生骨密度
  骨小梁厚度（Tb.Th）	正常兔橈骨約120μm，修復后需≥80μm	評估材料促骨小梁成熟能力

2. 組織病理學分析

• 染色技術：

  染色方法	評估目標	判定標準
  HE染色	新生骨面積占比、骨髓腔再通	缺損中央新生骨面積<30%為未愈合
  Masson染色	膠原沉積比例（Ⅰ/Ⅲ型膠原比值>2為成熟瘢痕）	區分編織骨與板層骨

• 免疫組化：

• Runx2、OCN：成骨細胞活性標志物，表達上調提示材料促分化能力。

• CD31：新生血管密度≥3個/HPF為血管化達標。

3. 生物力學測試

• 三點彎曲試驗：修復后骨強度恢復率需>60%（正常兔橈骨抗彎強度約120MPa）。

• 壓縮試驗：彈性模量接近宿主骨（成年兔橈骨約1.5GPa）。

四、模型創新與優化方向

1. 基因工程與干細胞技術：

• HIF-1α誘導BMSCs：缺氧預處理增強干細胞存活率，新生骨體積提升40%。

• BMP-2/bFGF雙基因轉染：協同促進成骨分化，Runx2表達量升高3倍。

2. 智能材料設計：

• 3D打印梯度支架：PCL/納米羥基磷灰石復合材料，孔隙率85%模擬松質骨結構。

• 光熱響應水凝膠：近紅外觸發抗菌肽釋放，降低感染率70%。

3. 動態監測技術：

• 植入式傳感器：實時監測局部pH、IL-6濃度，無線傳輸數據。

• 光聲成像（PAI） ：無創評估血管新生，分辨率達10μm。

4. 多組學整合：

• 單細胞轉錄組：解析缺損區巨噬細胞M1/M2極化時序。

• 空間代謝組：定位骨修復過程中的脂質代謝熱點區域。

五、模型選擇策略

六、挑戰與倫理考量

1. 標準化不足：

• 不同實驗室缺損尺寸、骨膜處理方式差異導致數據可比性下降，需推動國際共識（如ARRIVE指南擴展版）。

2. 轉化瓶頸：

• 嚙齒類與人類骨代謝差異顯著，大型動物模型成本高昂（如綿羊模型單只成本>5萬元）。

3. 動物福利：

• 設置生存質量閾值：體重下降>15%或活動量減少>50%需終止實驗。

• 替代技術推廣：器官芯片模擬骨缺損微環境，減少活體使用量80%。